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Alto contenuto fenotipica Cell-Based Visual Screen Identifica Mycobacterium tuberculosis Acyltrehalose-contenenti glicolipidi coinvolta nel rimodellamento Phagosome
La capacità del bacillo di tubercolo di arrestare la maturazione phagosome è considerata una importante meccanismo che permette la sopravvivenza all'interno di macrofagi host. Per identificare i geni dei micobatteri coinvolti in questo processo, abbiamo sviluppato un throughput elevato fenotipico a base di test che consente di cellule singole analisi sub-cellulare di oltre 11.000 Mycobacterium tuberculosis mutanti. Questo test molto rigorosi fa uso di colorazione fluorescente per compartimenti intracellulari acido, e automatizzata microscopia confocale per determinare quantitativamente la localizzazione intracellulare di M. tubercolosi. Abbiamo caratterizzato i mutanti dieci traffico più frequentemente in acidificato compartimenti subito dopo la fagocitosi, suggerendo che avevano perso la loro capacità di arresto maturazione phagosomal. L'analisi molecolare di questi mutanti ha rivelato principalmente disagi in geni coinvolti nella biogenesi busta cella (fadD28), il 1 ESX-sistema di secrezione (Espl/ Rv3880), biosintesi molybdopterin (moaC1 e moaD1), così come in geni da un locus romanzo, Rv1503c -Rv1506c. Più interessante, i mutanti in Rv1503c e Rv1506c sono state perturbate nella biosintesi di acyltrehalose contenenti glicolipidi. I nostri risultati suggeriscono che tale glicolipidi davvero giocare un ruolo critico nel destino intracellulare precoce del bacillo della tubercolosi. L'approccio imparziale qui sviluppato può essere facilmente adattato per lo studio della genomica funzionale di agenti patogeni intracellulari, insieme con la scoperta di nuovi focalizzata antimicrobici.
Riassunto Autore Top
Uno dei principali meccanismi di virulenza del bacillo della tubercolosi, Mycobacterium tuberculosis, è la sua capacità di resistere uccisione da parte delle cellule fagocitarie del sistema immunitario dell'ospite, vale a dire i macrofagi. degradare invadendo microbi macrofagi da immersione all'interno di un vacuolo, o phagosome, che acidifica e si accumula progressivamente le proprietà idrolitica. M. tubercolosi ha la capacità unica di bloccare phagosome maturazione e l'acidificazione. Per identificare i geni coinvolti in arresto da micobatteri maturazione phagosome, abbiamo sviluppato un high-throughput nuova tecnologia basata su automatizzati microscopia confocale. Abbiamo vagliato una biblioteca contenente oltre 11.000 M. tubercolosi mutanti, e si potrebbe definire 10 mutanti che avevano perso la loro capacità di resistere acidificazione phagosome. Caratterizzazione genetica di questi mutanti ha rivelato che portavano le lesioni in geni coinvolti nei processi cellulari, tra cui biogenesi della dotazione delle cellule. In particolare, due mutanti indipendente nel locus genetico stesso ha alterato produzione di due lipidi, vale a dire diacyltrehalose (DAT) e sulfoglycolipid (SGL). vitro esperimenti hanno mostrato che la SGL può effettivamente influenzare la maturazione phagosome. Il nostro studio si dipana il ruolo delle molecole lipidiche romanzo in micobatteri parassitismo intracellulare, il nostro approccio può essere utile per identificare i geni di virulenza di altri agenti patogeni intracellulari, e di identificare nuovi antibiotici.
http://www.plospathogens.org/article/info:...al.ppat.1001100.