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Centro Benessere Kundalini.
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Buongiorno mi č arrivato un file in pdf confidenziale dagli U.S.A. dove č stata fatta questa "scoperta" e di quello che stanno combinando. La ricerca fatta riguarda l'aglio (che io giā uso da tempo come olio essenziale per uso interno).e alcune patologie
L'aglio č stato usato in tutto il mondo per curare tosse, mal di denti, mal d'orecchi, forfora, l'ipertensione, l'isteria, diarrea, dissenteria, difterite, vaginiti e le condizioni di molti altri. L'aglio contiene una miscela complessa di petrolio e composti organosulfur solubili in acqua. disolfuro Diallyl (DADS), un componente di solubili in olio di aglio sembra essere efficace nel ridurre le cellule tumorali provenienti dal colon, del polmone e della pelle. Da qui il nostro studio si concentra sugli effetti dose-dipendente dei papā in un androgeno-dipendente linea cellulare di cancro alla prostata. varie concentrazioni dei papā che vanno da 25 a 100 mm sono stati dati alle cellule LNCaP e l'attivitā di lattato deidrogenasi (LDH), fosfatasi acida prostatica (PAcP) e il livello di antigene prostatico specifico sono stati studiati. DADS ridotto l'attivitā secretoria delle cellule LNCaP con l'aumento graduale del dosaggio. DADS č stato trovato ad agire come un buon agente antiproliferativo, che č stata confermata da test di proliferazione. DADS anche indotto apoptosi e la segmentazione nucleare in dosi pių alte. Copyright # 2005 John Wiley & Sons, Ltd.
Cancro alla prostata introduzione č diventata una delle pių comuni cause di morte nei maschi. Nei paesi occidentali č la seconda causa principale delle morti maschile. Il tasso di crescita del cancro alla prostata č in aumento dell'1% all'anno in countries.1 asiatico ha % circa del cancro della prostata dipende androgeno nelle fasi iniziali. Sistema endocrina terapia del cancro alla prostata č diretto verso la riduzione degli androgeni siero e l'inibizione dell'androgeno receptor.2 in una certa fase ablazione terapia androgeno in definitiva non riesce e il cancro alla prostata progredisce verso uno stato di ormone refrattari. Radiazione o chemioterapia hanno effetti collaterali potenzialmente angoscianti compresa la possibilitā di impotenza, incontinenza o entrambi. Nonostante i miglioramenti nella terapia, la mortalitā per cancro alla prostata č anche aumentato. Quindi, c'č un urgente bisogno di esplorare nuove terapie per la gestione di questa malattia. Ci sono evidenze che la supplementazione di diete con verdure allium tra cui aglio, cipolle, porri, erba cipollina, scalogno e scalogni ricchi di flavonoli e composti organosolfuri hanno properties.3,4 tumore inibitorio aglio (Allium sativum) č una pianta comune, usata principalmente come un elemento di cibo e si considera come erba medicinale in molte diverse culture del mondo. In generale, aglio č stato usato in tutto il mondo per curare la tosse, mal di denti, mal d'orecchi, forfora, ipertensione, isteria, diarrea, disentry, difterite, vaginiti e molti altri conditions.57 aglio contiene una complessa miscela di olio e watersoluble organosolfuri compounds.7 In esperimenti in vitro, composti solubili in olio come diallile disolfuro (papā), il solfuro di diallile (DAS) e diallile trisulfide (dat) sono efficaci come agenti antiproliferativa contro le cellule dei tumori mammari canino CMT-13, mentre la cisteina composti solubili in acqua S-allile, cisteina S-etil e cisteina S-propil hanno poco o nessun effect.8 inibitoria di oli essenziali di aglio contengono circa il 60% DADS.9 tra i costituenti di aglioPAPĀ sembra essere il pių efficace per ridurre le cellule tumorali.
Provenendo dal colon, polmone e skin.10 Knowles e Milner hanno riferito che papā č stato trovato ad avere un effetto di antiproliferativa sulla cells.11 di tumore del colon umana c'č risultata per essere un aumento transitorio nelle cellule in G2 M fase del ciclo cellulare e una diminuzione dell'attivitā della chinasi p34cdc2. Č stato riportato che papā indotta apoptosis in linea di cellulare di cancro al seno umano attraverso l'attivazione di caspase-3. 12 nel nostro presente inchiesta, abbiamo esplorato l'impatto antiproliferativa di papā sulla linea di cellule del cancro alla prostata androgendependent LNCaP. MATERIALI e metodi coltura delle cellule della linea di cell carcinoma prostatico LNCaP č stato ottenuto dal centro nazionale per la scienza di cella (CNC), Pune. Le cellule sono state coltivate in boccette di cultura che contiene il media RPMI 1640 completato con 15% FBS sotto il 5% CO2, 95% O2 a 37 C. Una volta raggiunta la confluenza, le cellule sono stati tripsinizzate e su 1 105 cellule erano placcate per pozzetto in piastre 24-bene e sono state incubate per 12 ore per attaccamento. Dopo 24 e 48 ore di trattamenti di papā, i media sono stati raccolti e le celle sono state fatte l'elettrolisi utilizzando 0,1% Triton X-100. I media condizionati e il lisati cellulari sono stati poi utilizzati per l'analisi dei seguenti parametri. Dosaggio dell'antigene specifico della prostata (PSA) The puō Ag PSA EIA kit č destinato per la determinazione quantitativa del totale PSA (antigene prostatico specifico). Questo kit č stato ottenuto dalla diagnostica Can Ag, AB Majnabbe terminale, SE 41455, Göteborg, Svezia. PSA č stato quantificato mediante il metodo della Nilson et al.13 The Ag puō EIA PSA č un immunoassay fase solida, non competitivo basato sulla tecnica diretta panino. Calibratori, controlli e i campioni sono stati incubati insieme a biotinylated anti-PSA monoclonale anticorpo e rafano perossidasi (HRP) etichettati anticorpo monoclonale anti-PSA in strisce rivestite con streptavidina microtitolo. Dopo il lavaggio, tamponato substrato (perossido di idrogeno) č stato aggiunto e la reazione dell'enzima č stata consentita di procedere. Poi č stato aggiunto il reagente cromogeno (Benzidina 3,30,5,50 metile) a ciascun pozzetto. L'intensitā del colore č stato determinato nello spettrofotometro piatto di microtitolo a 620 nm e anche facoltativamente a 450 nm dopo l'aggiunta di soluzione stop. Curve di calibrazione sono stati costruiti per l'analisi di ogni tracciando assorbanza contro la concentrazione di ciascun calibratore. La concentrazione di PSA di campioni č stato poi letto dalla curva di taratura. DNA agarosio gel elettroforesi agarosio gel elettroforesi č stata eseguita con il metodo di Chaudary et trattamento dopo il papā Czaja tra 24 e 48 h, le cellule sono stati lavati con PBS. Le cellule sono state centrifugate a 1000 g e risospese nel buffer di lisi (0,1 M Tris ū0.02 M EDTA ū0.8% SDS). Per questo fenolo: cloroformio: isoamile alcol (25:24:1) č stato aggiunto, misti e centrifugata a 9500 g per 15 min separare la fase acquosa superiore contenente DNA. Questa estrazione phenolchloroform č stato ripetuto due volte, finalmente il pellet č stato lavato con etanolo al 70%. Il pellet č stato consentito a secco a temperatura ambiente per circa 30 minuti e risospese in 50 ml di tampone Tris-EDTA (TE). Il DNA č stato quantificato da UVvisible spettroscopia e 10 mg di DNAwas electrophoresed in un gel di agarosio 1,2% contenente il bromuro di etidio in un serbatoio di mini gel contenente Tris buffer di EDTA (TBE) di acido borico per 2h sotto 90V. Poi il gel č stato esaminato nell'ambito del sistema di documentazione di gel di eroe LAB (Germania). Etidio bromuro/acridina (EB/AO) macchiatura etidio bromuro/acridina arancia macchiatura (EB/AO) č stata effettuata con il metodo delle Spector et al.15 25 ml di sospensione cellulare (0.52.0 106 ml 1) sono stati incubati con 1 ml di soluzione AO/EB (1 parte di 100 mgml 1 AO in PBS; 1 parte 100 EB mgml 1 in PBS), mescolate delicatamente e ogni campione č stata valutata immediatamente. Della sospensione delle cellule 10ml fu posto su un microscopio usando un filtro di fluoresceina dell'obiettivo di 60 e fu visto. Analisi di proliferazione proliferazione cellulare č stato valutato dalla method.16 Crystal violet cellule (5 104) erano placcate in piastre multiwell 24-bene con il supporto di RPMI contenente 10% FBS. Le cellule sono state incubate per 12h sotto il 5% CO2, 95% O2 a 37 C. Il controllo piastre ricevuti 0,01% DMSO contenenti medio e trattamento piastre ricevuto concentrazioni di 25, 50, 75 e 100 mM di papā contenenti medio. Dopo 24 e 48 h sono state lavate le cellule nel monostrato due volte con PBS. Poi 0,1% cristalvioletto in PBS č stato aggiunto alle piastre. Dopo 10 minuti la tintura di eccesso č stato rimosso da lavaggio tre volte con acqua distillata e le cellule erano aria secca per 20 h. La tintura incorporata č stata solubilizzata in 0. 1M citrato di sodio soluzione in etanolo al 50%. Al fine di determinare il numero di cellule in ogni campione, č stata misurata l'assorbanza a 550 nm in uno spettrofotometro 4000 Ultraspec.
Saggio di lattato deidrogenasi (LDH) lattato deidrogenasi attivitā č stata misurata in entrambi lysate delle cellule e nel medio-condizionata. Dopo l'incubazione h 24 e 48 il mezzo di coltura č stata presa separatamente e le cellule allegate erano fatte l'elettrolisi con l'aggiunta di 0,1% Triton X-100 e sottoponendoli a due cicli di congelamento e scongelamento. L'attivitā di LDH č stata misurata con il metodo di King.17 per un breve periodo, il buffer di reazione del substrato (0,5 mM acido lattico ū0.1 NaOH N ū0.1 glicina m tampone) č stato aggiunto alla cella lysate e media. Dinitro-fenilidrazina (0,02%) č stato aggiunto come agente cromogenica e i valori di assorbanza a 460 nm sono state lette in un Ultraspec 4000 spettrofotometro. Saggio di fosfatasi acida prostatica (PAcP) attivitā della fosfatasi acida prostatica (PAcP) č stata misurata in lisati cellulari. Dopo l'incubazione h 24 e 48, il mezzo di coltura č stata presa separatamente e le cellule allegate erano fatte l'elettrolisi con l'aggiunta di 0,1% Triton X - 100 e sottoponendoli a due cicli di congelamento e scongelamento. L'attivitā di PAcP č stata misurata con il metodo delle Tenniswood et al.18 in breve, il buffer di reazione del substrato (0,5 ml di 0,1 m citrato tampone (pH 4,85) ū0.5 ml di substrato di fosfato di 0,4% p-nitrofenil) č stato aggiunto il 200 ml di lysate delle cellule. La reazione č stata arrestata con l'aggiunta di 3,8 ml di NaOH N 0. Nitrofenolo rilasciato č stata misurata a 410 nm in uno spettrofotometro 4000 Ultraspec. Analisi statistica unidirezionale analisi della varianza (ANOVA). I dati sono stati sottoposti ad analisi statistica usando unidirezionale, analisi della varianza (ANOVA) adottata da Zar.19 risultati figura 1 rappresenta l'effetto di papā sulla colorazione viola di cristallo per l'analisi di proliferazione delle cellule nella linea LNCaP cella per entrambi 24 e 48 ore. C'č stato un calo significativo del numero di cellule a concentrazioni di 50, 75 e 100 mM di papā per il trattamento di 24 ore su 24. Con trattamento di 48 ore, č stata osservata una significativa diminuzione nel numero di cellule in tutte le concentrazioni, che vanno da 25 a 100 mM, di cellule trattate con papā. I dati ottenuti per l'effetto di papā sull'attivitā del PAcP in lisati cellulari per trattamenti h 24 e 48 in linea LNCaP cella č mostrato nella figura 2. Una diminuzione significativa dell'attivitā del PAcP č stata osservata a 48 h in cellule trattate con papā di alle concentrazioni che vanno da 25 a 100 mM. Per 24 ore di trattamento di papā, č stata osservata una diminuzione significativa dell'attivitā del PAcP a concentrazioni di 50, 75 e 100 mM di papā. Figure 3 e 4 illustrare l'attivitā di LDH totale in lisati cellulari, cosė come nei media condizionato della linea LNCaP cella per trattamenti h 24 e 48. A 50, 75, concentrazioni di 100 mM, c'č stato un calo significativo dell'attivitā del LDH in lisati cellulari per entrambi ******* 0 1 2 3 4 25μM 50μM 75μM 100μM concentrazione di diallile disolfuro di controllo no. di cellule (104) 24 hrs 48 ore nella figura 1. Effetto di diallile disolfuro sulla proliferazione cellulare. Ogni barra rappresenta il valore medio e la linea verticale sopra denota SEM di cinque osservazioni; * significato a p < 0,05 ******* 0 20 40 60 80 100 120 controllo 25μM 50μM 75μM 100μM concentrazione di diallile disolfuro μM di p-nitrofenolo liberata/hr/mg proteine 24hrs 48 ore nella figura 2. Effetto di diallile disolfuro sull'attivitā della fosfatasi acida prostatica. Ogni barra rappresenta il valore medio e la linea verticale sopra denotes SEM di cinque osservazioni; * significato a p < 0,05 ****** 0 0,02 0,04 0,06 0,08 0 0,12 controllare 25μM 50μM 75μM 100μM concentrazione di diallile disolfuro μM di piruvato liberata/min/mg proteine 24hrs 48 ore nella figura 3. Effetto di diallile disolfuro sull'attivitā del lattato deidrogenasi in lysate delle cellule. Ogni barra rappresenta il valore medio e la linea verticale sopra denotes SEM di cinque osservazioni; * significato a p < 0,05 disolfuro di diallile nel cancro alla prostata 409 # John Wiley & Sons, Ltd. Copyright 2005 Cell Biochem FUNZ 2006; 24: 407412.
DISCUSSIONE nel presente studio, noi abbiamo indagato gli effetti del papā sulla proliferazione cellulare e l'apoptosi. PAPĀ č stato trovato per diminuire la cella numero con l'aumento di concentrazioni che vanno da 25 a 100 mM dopo 24 e 48 ore di trattamento. Si suggerisce che, papā aumenta la proteina p21waf1/cip1 che si occupa di arresto del ciclo cellulare in G1 o G2 fasi in entrambi CaCo-2 e HT-29 cells.20 effetto il papā in aumento di p21waf/cip1 č dovuta a acetilazione 14 lisina dell'istone H3, in questi due cellula. PAPĀ induce istone hyperacetylation attraverso l'inibizione dell'istone deacetylases del (HDAC) activity.20 questo meccanismo potrebbe essere coinvolto nella riduzione del numero di cellule nella linea cellulare LNCaP. Nel presente studio, abbiamo osservato che papā indotta apoptosis, che č stato confermato dal danno al DNA causato dalle concentrazioni di 75 e 100 mM di papā per trattamenti h 24 e 48. Apoptosi sono un programma di morte delle cellule originariamente caratterizzato da specifiche modifiche morfologiche e biochimiche nelle cellule eucariotiche superiore. Questi cambiamenti strutturali, come blebbings di plasma e membrana nucleare, condensazione della cromatina, attivazione di proteasi e frammentazione del DNA sono considerati punti di riferimento della process.21,22 apoptotic il meccanismo mediante il quale papā provoca l'inibizione della crescita rimane poco chiaro mentre precedenti studi suggeriscono che il papā č un inibitore efficacia di ER-positivi e di ERnegative le cellule tumorali umane del seno. Le proprietā inibitoria di crescita di papā sono state attribuite a upregulation della proteina apoptotic Bax e downregulation di antiapoptotic Bcl-XL. PAPĀ anche induce apoptosi tramite attivazione di caspase-3. 12 In lavori effettuati da Sundaram e Milner, č stato dimostrato che il papā ha causato una sostenuta e dosedependent aumento intracellulare Ca2ū in cells.10 HCT-15 calcio intracellulare eccessivo č frequentemente associata con l'attivazione di endonucleases Ca2ū-dipendente. Attivazione di questi enzimi č noto per indurre l'apoptosi in diversi models.2326 in vitro nella presente inchiesta, č stato osservato che papā ha aumentato in modo significativo la fuoriuscita di LDH dosati in trattamenti h 24 e 48. Perdite LDH controlla l'integritā e la permeabilitā della membrana di plasma ed sono sensibile e facile da perform.27 sembra che papā aumenta la permeabilitā della membrana di plasma e quindi vi č una perdita di LDH dalle cellule nel mezzo e di conseguenza č stato osservato un aumento nell'attivitā di LDH nei media condizionato e attivitā LDH una diminuzione nella cella lysate. Questi risultati suggeriscono che papā č citotossici per la linea cellulare LNCaP. Tuttavia nel ratto primario epatociti, papā in concentrazione di 0,5 a 1 mM, aumentato la cella viability.28 umana della prostata fosfatasi acida (PAcP) e rappresentano rispettivamente un enzima androgeno-reattiva e la proteina antigene prostatico specifico (PSA) e sono usati come indicatori per la diagnosi di cancro alla prostata. Nel nostro lavoro attuale č stato osservato che il papā siginificantly ridotto il livello di PAcP e PSA in lysate delle cellule e nei media condizionato, rispettivamente. Questo effetto potrebbe essere dovuto alla riduzione del numero di cellulare. Per concludere, papā inibito significativamente la crescita delle cellule del cancro della prostata in vitro possibilmente da entrambi upregulation di apoptotic Bax e downregulation di antiapoptotic Bcl-XL o aumentando la proteina 1/cip1 p21waf. RIFERIMENTI 1. 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Traduzione on-line www.lexicool.com/translate.asp?IL=2#.